胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）主要以健康母牛怀孕4~8月龄的胎牛血液为原料，经无菌采集、分离微孔过滤等多重程序后而成。目前广泛应用于各类真核细胞的细胞培养，为其提供关键营养成分以及接触和伸展因子，如今已成为各大实验室的“常驻嘉宾”。

为了将胎牛血清的作用发挥到最大，保证培养的细胞状态，我们有一些小Tips可以帮助实验小伙伴细胞实验更加顺利。我们一起来看看吧~

1.初次开封胎牛血清如何化冻？

胎牛血清常规储存温度为-20℃，如果需要更加长期的保存，可以-80℃保存。

解冻的时候不建议直接放在常温中（25-37℃）解冻，很容易产生絮状沉淀，进而有可能影响血清品质。建议的方式为先由-20℃/-80℃转移到4℃解冻，直至解冻全部为液体后，再由4℃转移到室温。在解冻的过程中，需要随时晃动，使血清内成分和温度混合均匀，有助于减少沉淀的产生。解冻后，就可以把血清用15 mL或者50 mL无菌离心管分装冻存啦，可以根据自己使用血清的频率，在4℃存放一管已化冻分装的血清，方便经常配制培养基。在4℃也不可以存放太久，最好在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不可以在37℃或者室温存放太久，避免血清中重要的细胞生长因子失活而影响细胞状态。

2.血清的用量？

原则上血清添加量不宜太多，通常添加5%、10%、20%。大部分细胞正常培养使用10%的血清浓度，部分细胞原代提取时使用20%血清。具体某一株细胞适应的血清浓度，需要根据细胞特性、实验目的摸索。

3.胎牛血清什么时候需要热灭活？

这就涉及到什么是热灭活。热灭活一般是以56℃，30 min来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。除了这些特殊实验要求，常规细胞培养需要热灭活吗？通常来说，热灭活对大多数细胞培养都不是必须进行的步骤，经此处理过的血清对细胞的生长作用很小，甚至可能会因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低，沉淀物增多等不好的影响。

4.更换血清的正确步骤是什么？

养细胞的小伙伴经常会遇到同一个细胞需要更换血清的情况。如果将另一款血清配制的培养基直接用于细胞培养，可能会发现以前增殖很快的细胞突然变慢甚至逐渐脱壁死亡了。这种情况下，多数为细胞被以往的培养环境驯化，突然更换一个新的营养环境，哪怕是品质更好的血清，也可能会出现不适应的情况。通常来说，更换血清的时候我们会遵循梯度更换保证细胞可以适应。血清开始使用时，如果是重新复苏细胞，建议用原培养体系进行细胞复苏，待细胞状态恢复后再进行测试。测试时不建议直接100%换成新血清体系进行培养，应按照比例梯度替换。例如，首次换液按照新旧体系1:3，第二次换液1:1，第三次换液3:1，而后完全替换。针对一些对培养体系较为敏感的细胞，需进一步细化替换比例。

5.血清解冻以后出现了悬浮物是什么？还能继续用吗？

解冻以后如果发现有少量乳白色的絮状或者点状物质，这种主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成的，这些絮状物不会影响血清本身的质量，可用400×g离心5 min取上清。不会对细胞有太大的影响。

6.血清在使用前是否需要对血清进行过滤？

一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。

7.使用血清培养细胞以后，镜下观察到会动的“小黑点”会是污染吗？

如果您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，黑点是否做不规则游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

(1)细胞生长过程中自然破碎后的细胞残骸；

(2)血清中的杂蛋白，可能是反复冻融的结果；

(3)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；

(4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

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